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關(guān)于籌建一個(gè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室所需的儀器

一、 上游分子克隆

分子克隆技術(shù)是分子生物學(xué)的核心技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)的主要目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，從而可以深入分析基因結(jié)構(gòu)與功能，并可達(dá)到人為改造細(xì)胞及物種個(gè)體的遺傳性狀的目的。

1. 分子克隆的基本技術(shù)路線：

1) 分離制備目的基因或DNA片段；

2) 目的DNA與載體在體外進(jìn)行連接；

3) 重組DNA分子轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞；

4) 篩選及鑒定陽(yáng)性重組體；

5) 重組體的擴(kuò)增。

2. 分子克隆常用儀器：

二、 核酸分子雜交

核酸分子雜交技術(shù)是分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的技術(shù)之一。其基本原理是具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下可按堿基互補(bǔ)原則形成雙鏈。由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測(cè)方法的高度靈敏性，使其在分子生物學(xué)領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用于分子克隆的篩選，基因組中特定基因序列的定量定性檢測(cè)，基因表達(dá)和基因突變分析及疾病的基因診斷等。根據(jù)核酸種類分為Southern印跡法和Northern印跡法。核酸分子雜交中常用的儀器：

三、 下游蛋白的表達(dá)及分離純化

目的基因能否發(fā)揮其效應(yīng),只能通過(guò)其表達(dá)有功能的蛋白質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn),因此蛋白質(zhì)的表達(dá)及分析方法成為分子生物學(xué)中必不可少的組成部分。

1. 蛋白的表達(dá)

大腸桿菌是自然界中最為人知的生物體之一。由于其具有操作簡(jiǎn)易，產(chǎn)量高和成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，使其成為蛋白質(zhì)表達(dá)的首選宿主。缺點(diǎn)是：表達(dá)缺乏翻譯后加工，得到的蛋白可能缺乏某些天然蛋白所具有的活性。酵母作為單細(xì)胞低等真核生物，具有易培養(yǎng)，繁殖快，便于基因操作等優(yōu)點(diǎn)，漸漸被開(kāi)發(fā)作為目的基因的表達(dá)系統(tǒng)。其中甲基酵母作為外源基因的表達(dá)系統(tǒng)，可以真實(shí)地表達(dá)目的基因且能分泌產(chǎn)物到培養(yǎng)液中，有利于純化等特點(diǎn)被廣泛的應(yīng)用。動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是：表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)過(guò)正確修飾，一般具有天然活性，但操作復(fù)雜，表達(dá)量較低，成本較高。所有的表達(dá)系統(tǒng)均各有利弊，需根據(jù)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)需要加以選擇。

2. 蛋白質(zhì)表達(dá)所需儀器

3. 目的蛋白的分離與純化所需儀器

蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)化學(xué)組成,結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能等的基礎(chǔ)。遺傳工程中，下游的處理和分析鑒定，基因工程產(chǎn)品的制備都需要純度較高的蛋白質(zhì)。